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中华人民共和国国家标准 中华人民共和国国家标准
食品中苯并(a)芘的测定方法 GB 5009.27-85
Method for determination of benzo(a)pyrene in foods
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本标晔视糜诟髦质称分斜讲(a)芘的测定。
第―法 荧光分光光度法
1 原理
样品先用有机溶剂提取，或经皂化后提取，再将提取液经液―液分配或色谱柱净化，
然后在乙酰化滤纸上分离苯并(a)芘, 因苯并(a)芘在紫外光照射下呈蓝紫色荧光斑点，将
分离后有苯并(a)芘的滤纸部分剪下，用溶剂浸出后，用荧光分光光度计测荧光强度与标
准比较定量。
2 试剂
2.1 苯：重蒸馏。
2.2 环己烷(或石油酸，沸程: 30～60℃)：重蒸馏或经氧化铝柱处理无荧光。
2.3 二甲基甲酰胺或二甲基亚砜。
2.4 无水乙醇：重蒸馏。
2.5 95％乙醇。
2.6 无水硫酸钠。
2.7 氢氧化钾。
2.8 丙酮：重蒸馏。
2.9 展开剂：95％乙醇-二氯甲烷(2:1)。
2.10 硅镁型吸附剂: 将60～100目筛孔的硅镁吸附剂经水洗四次(每次用水量为吸附剂质
量的4倍)于垂融漏斗上抽滤干后，再以等量的甲醇洗(<醇与吸附剂量克数相等)，抽滤干
后，吸附剂铺于干净瓷盘上，在130℃干燥5h后，装瓶贮存于干燥器内，临用前加5％水减
活，混匀并平衡4h以上，最好放置过夜。
2.11 层析用氧化铝(中性)：120℃活化4h。
2.12 乙酰化滤纸：将中速层析用滤纸裁成30×4cm的条状，逐条<入盛有乙酰化混合液
(180ml苯、130ml乙酸酐、0.1ml硫酸)的500ml烧杯中，使滤纸条充分地接触溶液,保持溶
液温度在21℃以上，时时搅拌，反应6h，再放置过夜。取出滤纸条，在通风橱内吹干，再
放入无水乙醇中浸泡4h，取出后放在垫有滤纸的干净白瓷盘上，在室温内风干压平备用。
一次可处理滤纸15～18条。
2.13 苯并(a)芘标准溶液：精密称取10.0mg苯并(a)芘，用苯溶解后移入100ml棕色容量
瓶中，并稀释至刻度，此溶液每毫升相当于苯并(a)芘100μg。放置冰箱中保存。
2.14 苯并(a)芘标准使用液：吸取1ml苯并(a)芘标准溶液置于10ml容量瓶中，用苯稀释
至刻度，同样反复用苯稀释，最后配成每毫升相当于1.0及0.1μg苯并(a)芘两种标准使用
液，放置冰箱中保存。
3 仪器
3.1 脂肪提取器。
3.2 层析柱：内径10mm，长350mm，上端有内径25mm、长80～100mm漏斗,下端具有活塞。
3.3 层析缸()。
3.4 K-D全玻璃浓缩器。
3.5 紫外光灯：带有波长为365nm或254nm的滤光片。
3.6 回流皂化装置：锥形瓶磨口处连接冷凝管。
3.7 组织捣碎机。
3.8 荧光分光光度计。
4 操作方法
4.1 样品提取
4.1.1 粮食或水分少的食品：称取40～60g粉碎过筛的样品，装入滤纸筒内，用70ml环己
烷润湿样品，接收瓶内装6～8g氢氧化钾、100ml95％乙醇及60～80ml环己烷，然后将脂肪
提取器接好，于90℃水浴上回流提取6～8h，将皂化液趁热倒入500ml分液漏斗中，并将滤
纸筒中的环己烷也从支管中倒入分液漏斗，用50ml95％乙醇分复蜗唇邮掌浚将洗液合并
于分液漏斗。加入100ml水，振摇提取3min，静置分层(约需20min)，下层液放入第二分液
漏斗，再用70ml环己烷振摇提取一次，待分层后弃去下层液，将环己烷层合并于第一分液
漏斗中，并用6～8ml环己烷淋洗第二分液漏斗，洗液合并。
用水傅雍喜⒑蟮幕芳和樘崛∫喝次, 每次100ml，三次水洗液合并于原来的第二分
液漏斗中，用环己烷提取二次，每次30ml，振摇0.5min，分层后弃去水层液，收集环己烷
液并入第一分液漏斗中，于50～60℃水浴上，减压浓缩至40ml，加适量无水硫酸钠脱水。
4.1.2 植物油:称取2025g的混匀油样,用100ml环己烷分次洗入250ml分液漏斗中,以环己
烷饱和过的二甲基甲酰胺提取三次，每次40ml，振摇1min，合并二甲基甲酰胺提取液，用
40ml经二甲基甲酰胺饱和过的环己烷提取一次，弃去环己烷液层。二甲基甲酰胺提取液合
并于预先装有240m12％硫酸钠溶液的500ml分液漏斗中，混匀, 静置数分钟后，用环己烷
提取二次，每次100ml，振摇3min，环己烷提取液合并于第一个500ml分液漏斗。也可用二
甲基亚砜代替二甲基甲酰胺。
用40～50℃温水洗涤环己烷提取液二次，每次100ml，振摇0.5min，分层后弃去水层
液，收集环和椴悖于50～60℃水浴上减压浓缩至40ml。加适量无水硫酸钠脱水。
4.1.3 鱼、肉及其制品：称取50～60g切碎混匀的样品，再用无水硫酸钠搅拌(样品与无
水硫酸钠的比例为1:1或1:2，如水分过多则需在60℃左右先将样品烘干)，装入滤纸筒内,
然后将脂肪提取器接好，加入100ml环己烷于90℃水浴上，回流提取6～8h，然后将提取液
倒入250ml分液漏斗中，再用6～8ml环己烷淋洗滤纸筒，洗液合并于250ml分液漏斗中,以下
按4.1.2自“以环己烷饱和过的二甲基甲酰胺提取三次”起依法操作。
4.1.4 蔬菜：称取100g洗净、晾干的可食部分的蔬菜，切碎放入组织捣碎机内，加150ml
丙酮,捣碎2min。在小漏斗上加少许脱脂棉过滤,滤液移入500ml分液漏斗中,残渣用50ml丙
酮分数次洗涤,洗液与滤液合并,加100ml水和100ml环己烷,振摇提取2min,静置分层,环己
烷层转入另一500ml分液漏斗中，水层再用100ml环己烷分二次提取，环己盘崛∫汉喜⒂
第一个分液漏斗中，再用250ml水，分二次振摇、洗涤，收集环己烷于50～60℃水浴上减压
浓缩至25ml, 加适量无水硫酸钠脱水。
4.1.5 饮料(如含二氧化碳先在温水浴上加温除去)：吸取50～100ml样品于500ml分液漏
斗中,加2g氯化钠溶解，加50ml环己烷振摇1min，静置分层，水层分于第二个分液漏斗中，
再用50ml环己烷提取一次，合并环己烷提取液，每次用100ml水振摇、洗涤二次,收集环己
烷于50～60℃水浴上减压浓缩至25ml，加适量无水硫酸钠脱水。
4.1.6 糕点类：称取50～60g磨碎样品,装于滤纸筒内，以下按4.1.1自“用70ml环己烷润
湿样品”起依法操作。
在4.1.1、4.1.3～4.1.6各项操作中，均可用石油醚代替环己烷，但需将石油醚提取
液蒸发至近干，残渣用25ml环己烷溶解。
4.2 净化
4.2.1 于层析柱下端填入少许玻璃棉，先装入5～6cm的氧化铝，轻轻敲管壁使氧化铝层
填实、m空隙，顶面平齐，再同样装入5～6cm的硅镁型吸附剂，上面再装入5～6cm无水硫
酸钠，用30ml环己烷淋洗装好的层析柱，待环己烷液面流下至无水硫酸钠层时关闭活塞。
4.2.2 将样品环己烷提取液倒入层析柱中,打开活塞,调节流速为每分钟1ml,必要时可用
适当方法加压，待环己烷液面下降至无水硫酸钠层时,用30ml苯洗脱,此时应在紫外光灯下
观察,以蓝紫色荧光物质完全从氧化铝层洗下为止,如30ml苯不足时,可适当增加苯量。收
集苯液于50～60℃水浴上减压浓缩至0.1～0.5ml(可根据样品中苯并(a)芘含量而定，应注
意不可蒸干)。
4.3 分离
4.3.1 在乙酰化滤纸条上的一端5cm处，用铅笔划一横线为起始线，吸取一定量净化后的
浓缩液，点于滤纸条上，用电吹风从纸条背面吹冷风，使溶剂挥散，同时点20μl苯并(a)
芘的标准使用液(1μg/ml)，点样时斑点的直径不超过3mm，层析缸(筒)内盛有展开剂，滤
纸条下B浸入展开剂约1cm，待溶剂前沿至约20cm时取出阴干。
4.3.2 在365或254nm紫外光灯下观察展开后的滤纸条用铅笔划出标准苯并(a)芘及与其同
一位置的样品的蓝紫色斑点，剪下此斑点分别放入小比色管中，各加4ml苯加盖，插入50～
60℃水浴中不时振摇，浸泡15min。
4.4 测定
4.4.1 将样品及标准斑点的苯浸出液移入荧光分光光度计的石英杯中，以365nm为激发光
波长, 以365～460nm波长进行荧光扫描，所得荧光光谱与标准苯并(a)芘的荧光光谱比较
定性。
4.4.2 与样品分析的同时做试剂空白, 包括处理样品所用的全部试剂同样操作，分 读
取样品、标准及试剂空白于波长406、406＋5、406-5nm处的荧光强度，按基线法由式(1)
计算所得的数值，为定量计算的荧光强度。
F = F406 - (F401 + F411)/2................(1)
4.5 计算
S1/F × (F1-F2) × 1000
X1 = ─────────────── .............(2)
m × V2/V1
式中：X1――样品中苯并(a)芘的含量，μg／kg;
S1―─苯并(a)芘标准斑点的含量，μg;
F―─标准的斑点浸出液荧光强度；
F1―─样品斑点浸出液荧光强度；
F2―─试剂空白浸出液荧光强度；
V1―─样品浓缩液体积，ml;
V2―─点样体积，ml;
m――样品质量，g。
第二法 目测比色法
5 原理
样品经提取、净化后于乙酰化滤纸上层析分离苯并(a)芘,分离出的苯并(a)芘斑点，
在波长365nm的紫外灯光下观察，与标准斑点>行目测比色概略定量。
6 试剂
同2.1～2.14。
7 仪器
同3.1～3.7。
8 操作方法
8.1 样品提取：按4.1.1～4.1.6的方法操作。
8.2 净化：按4.2.1～4.2.2的方法操作。
8.3 测定
8.3.1 吸取5、10、15、20或50 μl样品浓缩液(可根据>品中苯并(a)芘含量而定)10、
20μl及苯并(a)芘标准使用液(0.1μg/ml)，点于同一条乙酰化滤纸上。按4.3.1展开，
取出阴干。
8.3.2 于暗室紫外灯下目测比较，找出相当于标准斑点荧光强度的样品浓缩液体积，如
样品含量太高，可稀释后再重点，尽量使样品浓度在两个标准斑点之间。
8.4 计算
S2×1000
X2 = ───────..........................(3)
m×V2/V1
式中：X2――样品中苯并(a)芘的含量，μg/kg;
S2――样品斑点相当苯并(a)芘的含量，μg；
V1――样品浓缩总体积，ml;
V2――点样体积，ml;
m―─样品质量，g。
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附加说明：
本标准由全国卫生标准技术委员会食品卫生标准分委员会提出，由卫生部食品卫生监
督检验所归口。
本标准由辽宁省卫生防疫站、江苏省卫生防疫站负责起草。
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中华人民共和国卫生部1985-05-16发布 1985-12-01实施
标准法规
食品中苯并(a)芘的测定方法 GB
电话：0791-83670605
传真：0791-83670606
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