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中华人民共和国国家标准　　　　　　　　　　　　　中华人民共和国国家标准

　　　　　　　　　　　　　食品中糖精钠的测定方法　　　　　　　　GB 5009.28-85

Method for determination of saccharin sodium in foods
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本标准适用于各类食品中糖精钠的测定。

　　第一法　薄层色谱定性及半定量测定法

1　原理
在酸性条件下, 食品中的糖精钠用乙醚提取、浓缩、薄层色谱分离、显色后，与标准
比较，进行定性和半定量测定。
2 试剂
2.1 10%硫酸铜溶液。
2.2 4%氢氧化钠溶液。
2.3　6N盐酸: 取100ml盐酸, 加水稀释至200ml。
2.4　乙醚：不含过氧化物。
2.5　无水硫酸钠。
2.6　无水乙醇及95%乙醇。
2.7 展开剂
2.7.1 苯-乙酸乙酯-36%乙酸(12:7:1)。
2.7.2 三氯甲烷-丙B-甲酸(9:3:0.1)。
2.8　显色剂
2.8.1 溴甲酚绿-溴酚蓝显色剂:称取0.1g溴甲酚绿和溴酚蓝,加乙醇溶解并稀释至200ml。
2.8.2 0.04%溴甲酚紫: 50%乙醇溶液, 用0.1N氢氧化钠调至pH=8。
2.9 硅胶: GF254。
2.10 聚酰胺粉: 200目。
2.11 糖精钠标准溶液：精密称取0.0851g经120℃干燥4h后的糖精钠，加乙醇溶解，移入
100ml容量瓶中，加95%乙醇稀释至刻度。此溶液每毫升相当于1mg糖精钠(C6H4CONNaSO2・
2H2O)。
3 仪器
3.1 玻璃纸：生物制品透析袋纸或不含增白剂的市售玻璃纸。
3.2 玻璃喷雾器。
3.3 微量注射器。
3.4 紫外光灯：波长253.7nm。
3.5 薄层板：10×20cm或20×20cm。
3.6 展开槽。
4 操作方法
4.1　样品提取
4.1.1　饮料、冰棍、汽水：取10ml均匀试样(如样品中含有二氧化碳，先加热除去。如
样品中含有酒精，加4％氢氧化钠溶液使其呈碱性，在沸水浴中加热除去。)置于100ml分
液漏斗中, 加2ml6N盐酸，用30、20、20ml乙醚提取三次，合并乙醚提取液，用5ml盐酸酸
化的水洗涤一次，弃去水层。乙醚层通过无水硫酸钠脱水后，挥发乙醚，加2.0ml乙醇溶
解残留渣, 密塞保存，备用。
4.1.2 酱油、果汁、果酱等：称取20.0g或吸取20.0m1均匀试样，置于100ml容量瓶中，
加水至约60ml，加20ml 10％硫酸铜溶液，混匀，再加4.4m14％氢氧化钠溶液，加水至刻
度，混匀。静置30min。过滤，取50ml滤液置于150ml分液漏斗中，以下按4.1.1自“加2ml
6N盐酸”起依法操作。
4.1.3 固体果汁粉等：称取20.0g磨.的均匀试样，置于200ml容量瓶中，加100ml水，加
温使溶解、放冷。以下按4.1.2自“加20ml10％硫酸铜溶液"起依法操作。
4.1.4 糕点、饼干等蛋白、脂肪、淀粉多的食品：称取25.0g均匀试样，置于透析用玻璃
纸中，放入大小适当的烧杯内，加50ml 0.02N氢氧化钠溶液，调成糊状,将玻璃纸口扎紧,
放入盛有200ml 0.02N氢氧化钠溶液的烧杯中，盖上表面皿，透析过夜。
　量取125ml透析液(相当12.5g样品),加约0.4ml 6N盐酸使成中性，加20ml 10％硫酸铜
溶液，混匀，再加4.4ml4％氢氧化钠溶液，混匀,静置30min,过滤。取120ml滤液(相当10g
样品)，置于250ml分液漏斗中，以下按4.1.1自“加2ml 6N盐酸”起依法操作。
4.2　薄层板的制备
4.2.1　硅胶GF 254薄层板: 称取2g硅胶GF 254，加水调成糊状，涂成0.25～0.30mm厚的
10×20cm或20×20cm的薄层板，稍干后，于110℃活化1h，取出后置于干燥器内备用。
4.2.2　聚酰胺薄层板：称取1.6g聚酰胺,加0.4g可溶性淀粉，加约15ml水，研磨3～5min,
立即涂成0.25～0.30mm厚的10×20cm的薄层板，室温干燥后，在80℃下干燥1h。置于
干燥器中保存。
4.3　点样
　　在薄层板下端2cm处，用微量注射器点10μl和20μl的样液二个点，同时点3.0、5.0、
7.0、10.0μl糖精钠标准溶液，各点间距1.5cm。
4.4　展开与显色
　将点好的薄层板放入盛有展开剂(2.7.1或2.7.2)的展开槽中，展开剂液层约0.5cm,并
预先已达到饱和状态。展开至10cm,取出薄层板,挥干,硅胶GF254板可在紫外光灯下观察。
如喷溴甲酚-溴酚蓝显色剂，先将板在90±5℃干燥箱放10～15min。斑点显黄色至蓝绿
色。如用聚酰胺板，按GB 5009.29-85《食品中山梨酸、苯甲酸的测定方法》操作。根据
样品点和标准点的比移值进行定性，根据斑点大小进行半定量测定。
4.5　计算

　　 A1 × 1000
X1 = ────────────..............(1)
m1 × V2/V1 × 1000

　　式中：X1─―样品中糖精钠的含量，g/kg或g/l;
　　　　　A1─―测定用样液中糖精钠的含量，mg;
m1─―样品质量(体积)，g(ml)；
　　　　　V1──样品提取液残留物加入乙醇的体积，ml;
　　　　　V2─―点板液体积，ml。

第二法　紫外分光光度法

5　原理
　　在酸性条件下，食品中的糖精钠用乙醚提取，经薄层分离，溶于碳酸氢钠溶液中，于
波长 270nm处测吸光度。与标准比较，定量。
6　试剂
6.1　2％碳酸氢钠溶液。
6.2　糖精钠标准溶液:精密称取0.0851g经120℃干燥4h后的糖精钠,置于100ml容量瓶中,
加2%碳酸氢钠溶解,并稀释至刻度。此溶液每毫升相当于1mg糖精钠(C6H4CONNaSO2・2H2O)。
6.3　其他试剂同第2章。
7　仪器
7.1 分光光度计。
7.2　其他仪器同第3章。
8　操作方法
8.1　样品提取
　　　同4.1。
8.2　薄层板的制备
　　　同4.2。
8.3 点样
　　在薄层板的下端2cm处中间，用微量注射器点样, 将200～400μl样液点成一横条状，
条的右端1.5cm处，点10μl糖精钠标准溶液(2.11)，使成一小圆点。
8.4 展开
　　将点好的薄层板按4.4展开,在紫外光灯下观察,将薄层板上样品中糖精钠的条状斑,连
同硅胶GF 254或聚酰胺刮入小烧杯中，同时刮一块和样品条状大小相同的空白薄层板置于
另一烧杯中做对照用。刮下的含糖精钠的吸附剂与对照吸附剂各加5.0ml 2％碳酸氢钠溶
液，50℃加热助溶，移入10ml离心管中，离心分离(3000r/min)20min，取上清液备用。
8.5　标准曲线制备
　　吸取0.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0ml糖精钠标准溶液(6.2),分别置于100ml容量瓶
中,各加2%碳酸氢钠溶液至刻度混匀(每毫升分别相当0、0.020、0.040、0.060、0.080、
0.10mg糖精钠)于波长270nm测吸光度，绘制标准曲线。
8.6　测定
　　将样品离心液、试剂空白液，于波长270nm分别测吸光度，与标准比较。
8.7　计算
(A2-A3) 
X2 = ──────────× V5...................(2)
m2 × V4/V3
式中：X2──样品中糖精钠的含量,g/kg或g/L；
　　　A2――测定用样品溶液中糖精钠含量，mg/ml；
　　A3―─空白溶液中相当糖精钠含量，mg/ml;
V5――溶解刮下糖精钠时所用2％碳酸氢钠溶液体积，ml;
　　　m2──样品质量(体积)，g(ml);
　　　V3――样品残留物加入乙醇的体积，ml;
　　　V4─―点样用样品乙醇溶液的体积，ml。
注:本方法可同时测定苯甲酸。样品提取、点板(在板上点10μl0.1mg/ml苯甲酸标准
溶液)、展开等测定方法均同糖精钠的测定。紫外分光光度法定量时,从薄层板刮
下的苯甲酸斑点，溶于10.0ml2％碳酸氢钠溶液中，取5.0ml置于50ml容量瓶中，
加1ml6N盐酸，摇匀,加水稀释至刻度，于波长230nm测吸光度。
标准曲线制备：取0.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0ml苯甲酸标准溶液(0.1mg/ml)
分别置于100ml容量瓶中，加2％碳酸氢钠溶液至10ml，加1ml6N盐酸溶液，振摇，
加水稀释至刻度，同样品溶液测定。

　　　　　　　　　　　　第三法　酚磺酞比色法

9　原理
　　在酸性条件下，样品中的糖精钠用乙醚提取分离后与酚和硫酸在175℃作用，生成的
酚磺酞与氢氧化钠反应产生红色溶液，与标准系列比较定量。
10 试剂
10.1　苯酚：取无色结晶苯酚配成1:1(W/W)硫酸溶液。
10.2 20％氢氧化钠溶液。
10.3 碱性氧化铝：层析用。
10.4　液体石蜡：作油浴用。
10.5　其他试剂同2.1～2.5。
11　仪器
11.1 油浴：175±2℃。
11.2 分光光度计。
11.3 层析柱。
12 操作方法
12.1 提取:
　　同4.1。
12.2　测定
　　　取一定量(含糖精钠0.2～0.6mg)的样品乙醚提取液，置于蒸发器中，于水上慢慢将
乙醚蒸发至约10ml，转入100ml比色管或100ml锥形瓶中,将乙醚挥发至干,然后置于100℃
干燥箱中20min,取出，加入5.0ml苯酚-硫酸溶液，旋转至苯酚―硫酸与管壁充分接触，于
175±2℃的油浴或干燥箱中加热2h(温度达到175℃时记时间)，取出后放冷,小心加20ml水,
振摇均匀，再加10ml20％氢氧化钠溶液，加水至100ml，混匀。然后通过5.0g碱性氧化铝
柱层并接收流出液，用1cm比色杯以乙醚空白管为零管，于波长558nm测吸光度。
12.3 标准曲线的制备　
　　精密称取未风化的糖精钠0.1000g，加20ml水溶解后转入125ml分液漏斗中，并用10ml
水洗涤容器, 洗液转入分液漏斗中, 加6N盐酸使呈强酸性，用30、20、20ml乙醚分三次振
摇提取，每次振摇2min。将三次乙醚提取液均经同一滤纸上装有10g无水硫酸钠的漏斗脱
水滤入100ml容量瓶中，用少量乙醚洗涤滤器, 洗液并入容量瓶中并稀释至刻度，混匀。
此溶液每毫升相当于1mg糖精钠。
取上述乙醚标准溶液0.2、0.4、0.6、0.8ml，分别置于100ml比色管中或100ml锥形瓶
中，将乙醚在水浴上蒸干。
　　另取50ml乙醚，分次置于100ml比色管中或100ml锥形瓶中，在水浴上缓缓蒸发至干。
　　将标准管与乙醚空白管，置于100℃干燥箱中20min，以下按12.2自“取出加入5.0ml
苯酚-硫酸溶液”起依法操作，绘制标准曲线。
12.4　计算
A4-A5×1000
　　　　　　　X3 = ─────────── ....................(3)
　　　　　　　　　　　　m3×V7/V8×1000
式中：X3──样品中糖精钠含量，g/kg或g/l;
　　　A4――测定用溶液中糖精钠量，mg;
　　　A5──空白溶液中糖精钠量，mg;
　　　m3──样品质量或体积，g或ml;
　　　V6──样品乙醚提取液总体积，ml;
　　　V7──比色用样品乙醚提取液体积，ml。

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附加说明：
　　本标准由全国卫生标准技术委员会食品卫生标准分委员会提出，由卫生部食品卫生监
督检验所归口。
　　本标准第一法由辽宁省卫生防疫站、卫生部食品卫生监督检验所负责起草。
　　本标准第二法由天津市卫生防疫站负责起草。
　　本标准第三法由辽宁省卫生防疫站负责起草。
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中华人民共和国卫生部1985-05-16发布 1985-12-01实施